1、Northern印跡、Southern印跡、Western印跡區(qū)別對比

2、印跡膜特性

• 印跡膜作為印跡技術(shù)中的重要固相支持物的主要特性
• NC印跡膜、尼龍印跡膜和PVDF印跡膜的區(qū)別

3、印跡膜性能驗證

4、邁博瑞印跡膜參數(shù)

Southern blot

Northern blot

Western blot

定義

 用于識別特定DNA序列的程序 

Southern blot的改編，通過與互補DNA的雜交來檢測特定RNA序列

用于鑒定蛋白質(zhì)中特定氨基酸 序列的印跡程序

開發(fā)者

1975年，愛德華

1977年，詹姆斯.阿爾溫等人

1979年，喬治.斯塔克

檢測到的分子類型

特異性DNA序列

特異性RNA序列

特定蛋白質(zhì)

電泳

瓊脂糖凝膠電泳

甲醛瓊脂糖凝膠電泳

SDS PAGE/聚丙烯酰胺凝膠

印跡程序

毛細(xì)管轉(zhuǎn)移

毛細(xì)管轉(zhuǎn)移

電動傳輸

探針

DNA探針

cDNA探針

一抗和二抗

樣本制備

變性處理

自然狀態(tài)

自然狀態(tài)

應(yīng)用

檢測給定樣品中特定DNA序列
親子鑒定、DNA指紋圖譜
受害者識別、識別犯罪
遺傳疾病和傳染因子檢測
基因重排突變和鑒定

識別給定樣品中特定RNA序列
有助于疾病的檢測
基因表達(dá)研究

識別給定樣品中的蛋白質(zhì)數(shù)量
檢測血清中病毒或細(xì)菌存在
檢測有缺陷的蛋白質(zhì)
用作某些疾病診斷的明確措施

檢測系統(tǒng)

放射自顯影、光檢測和顏色變化

放射自顯影、光檢測和顏色變化

檢測光線和顏色變化

名稱

特點

NC 印跡膜

無支撐布

不添加洗滌劑

100% 純硝化纖維

高蛋白結(jié)合能力

毛細(xì)管率與厚度一致

背淺

PVDF 印跡膜

耐化學(xué)性

無變色

非易燃

高強(qiáng)度

疏水性

背景淺

高蛋白結(jié)合

尼龍印跡膜

親水性

高強(qiáng)度

高化學(xué)耐受性

高蛋白結(jié)合力

正電尼龍印跡膜

硝酸纖維素印跡膜

PVDF印跡膜

DNA或RNA截留力

480-600ug/cm2

80-100ug/cm2

125-300ug/cm2

蛋白截留力

500ug/cm2

80-100ug/cm2

100-300ug/cm2

結(jié)構(gòu)強(qiáng)度

柔韌、耐化學(xué)試劑，可重復(fù)剝離

膜脆、易破碎，不可重復(fù)使用

強(qiáng)度高、耐高溫、可重復(fù)剝離

吸附力

電荷和疏水作用

疏水作用和電荷

疏水作用和電荷

是否需活化

無需活化

無需活化

需要活化

檢測方法

放射性標(biāo)記探針
酶抗體偶聯(lián)物（化學(xué)發(fā)光、顯色、化學(xué)熒光）

放射性標(biāo)記探針
直接染色，熒光
酶抗體偶聯(lián)物（化學(xué)發(fā)光、顯色）

直接染色
酶抗體偶聯(lián)物（化學(xué)發(fā)光、顯色）